一种梯棱羊肚菌菌种工厂化生产及北方设施化栽培技术的制作方法

本发明涉及食用菌生产的工艺技术领域中的一种梯棱羊肚菌菌种工厂化生产及北方设施化栽培技术，特别涉及食用菌菌种的工厂化瓶装及袋装菌种制备和设施化栽培方法。

背景技术：

梯棱羊肚菌（学名：morchellaimportuna），中文根据该种的菌盖特征，因垂直的脊和脊与脊之间的横隔，命名为“梯棱羊肚菌”，也有人称之为梯纹羊肚菌。

梯棱羊肚菌是近年来我国科研人员成功驯化的一个重要羊肚菌品种，因该品种的菌盖表面从上至下明显的脊和脊与脊之间的横隔，使其如梯子一般而得名。该品种在我国四川、云南、鄂西南地区分布。该品种在分类上属于黑色羊肚菌直系，是目前中国羊肚菌人工栽培的主要品系。北方的梯凌羊肚菌菌种工厂化生产及设施化栽培技术正处于迅速发展阶段。

生物形态特征：子囊果6.0-20.0cm高，菌盖3.0-15.0cm高，最宽处2.0-9.0cm，圆锥形至宽圆锥形，偶见卵圆形；12-20条竖直方向的主脊，以及大量交错的横脊，呈现出梯子一样的阶梯状；菌柄与菌盖连接处有2-5mm深，2-5mm宽的凹陷；脊光滑或具轻微绒毛，幼嫩时苍白色至深灰色，随着成熟逐渐变为深灰棕色至近乎黑色；幼嫩时脊整体上钝圆状，成熟后变得锐利或侵蚀状；凹坑在各个发育阶段上呈竖直方向延展，光滑或具轻微绒毛，老熟后呈开裂状，从幼嫩时的灰色至深灰色随着成熟逐渐变为棕灰色、橄榄色或棕黄色；菌柄3.0-10.0cm高，2.0-6.0cm宽，通常基部成棒状至近棒状，表面光滑或偶见白色粉状颗粒，成熟过程中逐渐发育有纵向的脊和腔室，特别是在菌柄基部的位置；菌柄白色至浅棕色，菌肉白色至水浸状棕色，中空，1-3mm厚，菌柄基部有时呈叠状腔室；不育的内层表面白色，具绒毛；八孢子囊孢子，18-24×10-13μm，椭圆形，光滑，同质；子囊125-300×10-30μm；圆柱形顶端钝圆，无色；侧丝150-250×7-15μm，圆柱形具圆形到近棒状、近锥形或近纺锤状的顶端有隔，加2%的koh呈无色至棕褐色；不育脊上的刚毛125-300×10-35μm，有隔，加2%的koh呈无色或棕色至棕褐色，顶端细胞圆柱状具圆形顶部，近头状、头状、近圆锥状或近纺锤状。

生长环境：常发生在太平洋西北部和加利福尼亚北部的花园、庄园、木材厂和城市绿化林下，每年的3月至5月发生，该种也被认为是很明显的腐生型羊肚菌品种，即便是少量的标本曾报道与相关树木有一定的关系，曾被认为是“最易成功栽培”的羊肚菌品种之一。

专利号00112812.4公开了一种羊肚菌的栽培方法，该栽培方法存在的问题是:仅有栽培技术，不涉及菌种生产技术；栽培技术叙述不详细；其提供的大田栽培羊肚菌技术不适合北方使用。

专利号201510362273.5公开了一种羊肚菌工厂化后补营养料栽培方法，该栽培方法存在的问题是：仅有栽培技术，不涉及菌种生产技术；其栽培技术仅适用棚架栽培，需要采用巴氏消毒法对培养土进行灭菌、消毒处理，耗能较大，大量的培养土来源较难。

专利号201610049355.9公开了一种羊肚菌的液体菌种繁育方法和工厂化栽培方法，该栽培方法存在的问题是：该专利提供的羊肚菌液体菌种的生产技术，液体菌种不易储存和运输；该专利提供的袋栽技术，需要在棚室内挖栽培坑，用工量较大。该技术不适合北方的羊肚菌生产,其仅仅提到羊肚菌栽培技术，未提及梯棱羊肚菌的栽培技术。

现有技术中北方梯棱羊肚菌的栽培方法：在梯棱羊肚菌菌种制作、水合处理、栽培袋制作、种植和管护步骤，梯棱羊肚菌菌种培养、栽培料采用、固体菌种撒播、水合处理、保持土壤湿度等方面的配制及运用上还存在一些问题。生产周期长，产品价格高。因此，研制开发一种梯棱羊肚菌菌种工厂化生产及北方设施化栽培技术一直是急待解决的课题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种梯棱羊肚菌菌种工厂化生产及北方设施化栽培技术，解决存在的问题，实现梯棱羊肚菌菌种进行工厂化瓶装和袋装生产，培育后用于羊肚菌的设施化生产。

本发明的梯棱羊肚菌（morchellaimportuna）hs-ydj07，已经于2017年6月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称cgmcc,地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏编号为：cgmccno.14347。

本发明的梯棱羊肚菌（morchellaimportuna）hs-ydj07，经中科院微生物研究所的培养特征、显微特征以及rrna基因序列等实验数据综合分析，确认hs-ydj07的鉴定结果为morchellaimportunas梯棱羊肚菌。

本发明的目的是这样实现的：一种梯棱羊肚菌菌种，所述的梯棱羊肚菌菌种为梯棱羊肚菌hs-ydj07，保藏编号为：cgmccno.14347；

所述的一种梯棱羊肚菌菌种的rrna基因序列是：

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所述的一种梯棱羊肚菌菌种工厂化生产是以梯棱羊肚菌hs-ydj07为母种进行培育、发菌的，其梯棱羊肚菌菌种工厂化生产工艺流程是：

（1）母本选择：

清晨还没有浇水之前，采摘6-7分熟的羊肚菌子实体，无病害感染，虫害咬食的健康羊肚菌作为种菇，菇形与其母本的外观形态相似度越高越好，采菇后，切去带土的根部，装入灭菌后的样本袋中，做好标签；

（2）母种培养：

母种培养基：pda按比例配制，煮沸融化，分装到试管1/3处，灭菌：121℃,20分钟；取出，摆斜面，冷却至室温；在超净台下对子实体进行消毒，将羊肚菌菌帽与菌柄处掰断，将菇帽部分放到一边，只用菌柄部分，取5mm见方的一块羊肚菌组织，接入试管斜面培养基中部，塞好棉塞，18-20℃，培养3-4天，注意每天观察长势，杂菌感染严重的及时挑出；

（3）母种提纯：

在分离的过程中，难免有杂菌感染，根据羊肚菌菌丝生长速度快的特点，即使有羊肚菌菌丝与杂菌共同萌发生长，经过3天培养，羊肚菌菌丝长势会超过杂菌一大截，遇到这种情况时就可以进行提纯处理；

将接种钩擦拭消毒，然后在酒精灯火焰顺风方向取下等待提纯菌种试管棉塞，用接种钩在酒精灯火焰处灼烧消毒处理以后，将原来接入的已经感染杂菌的组织块部位的培养基一同钩出试管，没有感染杂菌长有羊肚菌菌丝的培养基保留1-2cm；注意接种钩尽量不要接触到杂菌感染的部分；然后仔细对接种钩进行彻底消毒处理以后就可以取保留的羊肚菌纯菌丝接入新的pda培养基中，大小以5mm见方一块为宜，然后将提纯后的试管贴好标签，做好记录，再放到18-20℃进行恒温培养；

（4）脱毒：

对分离到的菌株进行筛选并采取无底试管脱毒法进行处理；1000g培养基配制:木屑435g，石灰10g，尿素5g，水550g；无底试管一根；取上述培养基分成两小断装入无底试管中；具体方法：装料时先用直径小一点的试管插入无底试管内4cm处，然后装料2厘米后压实；接着装另一端，用手把培养料握成团，然后把试管口对着培养料团插进去2cm，再把另一头直径小一点的试管取下来从这一头把培养料向中间推进去，距离另一端培养料1cm处，最后两头用棉塞封口；注意：高压锅灭菌时试管要横放，不能竖放，其它操作按常规；接种时把母种接到任何一端，等羊肚菌菌丝长满了一端培养基后，其爬壁菌丝会隔空长到另一端培养基上，等到长满另一端后，取另一前端菌丝接种；

（5）母种保藏：母种编号保存，制备平行菌种，-80℃超低温冰箱保存3年；

（6）原种接种及培养：按照原种培养料配方；每个罐头瓶装100g，塑料膜封口，灭菌121℃,1小时，冷却，每个试管无菌操作接种15个罐头瓶；18-20℃，培养7-10天；

（7）栽培种接种及培养：按照栽培料配方；每个塑料袋装500g，封口，灭菌121℃,3小时；冷却，每个原种罐头瓶无菌操作接种60个塑料袋，18-20℃，培养15-20天；

（8）营养袋制备：按照营养袋配方；每个塑料袋，12×24cm，装500g，封口，灭菌121℃,3小时，冷却；

（9）入库：栽培菌种及营养袋4℃保存；

所述的一种梯棱羊肚菌菌种的北方设施化栽培技术是以梯棱羊肚菌hs-ydj07为母种进行出菇管理及采收的，其梯棱羊肚菌北方设施化栽培技术工艺流程是：

（1）棚室准备：

棚室处理：每年7-9月封闭棚室，高温3天，闷棚，除草、杀菌、除虫；

土质要求：透气好，无大石块，ph值7-8；

施肥：播种前7天，施撒发酵好的农家肥，以发酵好的金针菇菌糠或牛粪为主；

旋地：施肥、喷水后旋地，深度25-35cm；

遮阳：棚内铺设遮阳率75%的遮阳网；

喷水装置：铺设地面滴灌管带和空间微喷带；

作畦床：畦床宽80cm,高度15-20cm；

（2）菌种准备：

播种时间：北方每年9月中、下旬，气温到15-18℃；

菌种用量：每亩用菌种量150-180kg；

菌种挑选：菌种老化、太弱、有杂菌感染的剔除，选用表面和袋壁有黄色菌核的菌种；

拌种：将菌种块捏碎，放入干净的盆中加10%清水拌匀，在加入等量的土壤搅拌均匀；

（3）播种：将菌种均匀撒到畦面上，棚温控制在15-18℃；

（4）覆土：覆土厚度2-3cm，人工或开沟机均可；

（5）发菌管理：

温度：土壤温度维持10-15℃；

湿度：播种后3-5天,喷一次重水，平时维持土壤潮湿；

通气：棚内每天通风一次，每次30分钟；

光照：自然；

覆盖稻草：床面可用稻草盖严；

（6）营养袋摆放：

待羊肚菌菌丝生长到床面上时，开始摆放营养袋；摆放前，在营养袋贴地面打3-4排孔；营养袋要尽可能摆放到有白色菌丝的地方，每亩用营养袋1700个；排成“品”字形，营养袋离床边距离15cm；床面干燥时，在摆放营养袋前喷水，1天后摆袋；摆放营养袋后3天不能喷水，地表温度不能超过15℃；

（7）出菇管理：

菇蕾形成：营养袋疏松，地表菌丝变淡，原基形成；土壤温度在6±2℃时，重水喷灌，菇蕾出现；

温度：土壤温度6-10℃，地表温度2-18℃；

湿度：空气相对湿度75-85%，每天微喷2-3次，每次3-5分钟；

光照：自然；

通气：每天通风一次，每次0.5-1小时；

注意事项：菇蕾期不喷重水；

（8）二茬菇管理：

当第一茬菇完全出完，停水5-7天，增加棚内的通气量；喷水，等待二茬菇生长；

（9）采收：

当菌帽的蜂窝打开时，开始采收；

一等菇：菌帽长度5-7cm；

二等菇：菌帽长度4-5cm；

三等菇：菌帽长度2-4.5cm；

所述的一种梯棱羊肚菌菌种的工厂化生产的原种培养料配方由以下各组分重量配比制成1000g培养料：小麦140g，木屑105g，土壤70g，稻壳24.5g，白灰7g，石膏3.5g，水650g；

所述的一种梯棱羊肚菌菌种的工厂化生产的栽培种培养料配方由以下各组分重量配比制成1000g培养料：小麦140g，木屑105g，土壤70g，稻壳24.5g，白灰7g，石膏3.5g，水650g；

所述的一种梯棱羊肚菌菌种的工厂化生产的营养袋配方由以下各组分重量配比制成1000g培养料：小麦140g，木屑105g，土壤70g，稻壳24.5g，白灰7g，石膏3.5g，水650g。

本发明的有益效果：梯棱羊肚菌（morchellaimportuna）hs-ydj07的栽培方法是一种成本低、工序简单、周期短、重复性好、易于管护的羊肚菌栽培方法，既促进农民增收，又有利于生态保护的非林产业发展模式，同时为羊肚菌产业化发展提供了一个新的栽培菌株。

附图说明

下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。

图1是本发明的梯棱羊肚菌菌种工厂化生产工艺流程图。

图2是本发明的梯棱羊肚菌北方设施化栽培技术工艺流程图。

图3是本发明在显微镜下菌丝情况图。

图4是本发明的菌种母种培养图一。

图5是本发明的菌种母种培养图二。

图6是本发明的菌种母种培养图三。

图7是本发明的菌种原种培养图。

图8是本发明的菌种栽培种培养图。

图9是本发明的菌种拌种培养图。

图10是本发明的发酵菌种培养图。

图11是本发明的摆放营养袋培养图。

图12是本发明的栽培出菇情况图。

图13是本发明的栽培成熟情况图一。

图14是本发明的栽培成熟情况图二。

图15是本发明的采收梯棱羊肚菌图一。

图16是本发明的采收梯棱羊肚菌图二。

图17是本发明的采收梯棱羊肚菌称重图。

图18是本发明的栽培二茬菇出菇情况图。

具体实施方式

本发明的梯棱羊肚菌（morchellaimportuna）hs-ydj07，已经于2017年6月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称cgmcc,地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏编号为：cgmccno.14347。

本发明的梯棱羊肚菌（morchellaimportuna）hs-ydj07，经中科院微生物研究所的培养特征、显微特征以及rrna基因序列等实验数据综合分析，确认hs-ydj07的鉴定结果为morchellaimportunas梯棱羊肚菌。

实施例一

一种梯棱羊肚菌菌种，所述的梯棱羊肚菌菌种为梯棱羊肚菌hs-ydj07，保藏编号为：cgmccno.14347。

所述的一种梯棱羊肚菌菌种的rrna基因序列是：

3’-atgctaggccacgagggtcctgaaaaaagggctccaatttacgcccgcaactgcgaccggtgtgccatcggcgtatggagaaaggtgagcattttactgcaagcctatatatcccataactccacggttgatggcctcggtgctgtcgcatctggaggcgggtctacgtctatttaggacattgggaaactaattgccaatcgctatcccattaggccaaaaccccccaacgatagtaatcaaacccgatgggggaggaggtttttatgacgctcgaacaggcatgccccccggaataccagggggcgcaatgtgcgttcaaagattcgatgattcactgaattctgcaattcacattacttatcgcatttcgctgcgttcttcatcgatgtgggaaccaagagatccgttgttgaaagttttaacttttttgttttgttatgattctgacgtcggcttgttcacaaagagttttggttgttgttcctccccccagcgggtagccgggggaagcaaggcgggacaggtacgcagagggtttagatgggggcggctccgggtccggccaggacgttcaacaacgtaaagctactagccctggtggcccctcggctgcccttttctgtgtggttcttggtaatgatccttccgcaggttcacctacggaaaccttgtt-5’。

所述的一种梯棱羊肚菌菌种工厂化生产是以梯棱羊肚菌hs-ydj07为母种进行培育、发菌的，其梯棱羊肚菌菌种工厂化生产工艺流程是（详见附图1）：

（1）母本选择：

清晨还没有浇水之前，采摘7分熟的羊肚菌子实体，无病害感染，虫害咬食的健康羊肚菌作为种菇，菇形与其母本的外观形态相似度越高越好，采菇后，切去带土的根部，装入灭菌后的样本袋中，做好标签；

（2）母种培养：

母种培养基：pda,按比例配制，煮沸融化，分装到试管1/3处(或分装到三角瓶中)，灭菌：121℃,20分钟；取出，摆斜面（或无菌操作倒入已灭菌的平皿1/3处），冷却至室温；在超净台下对子实体进行消毒，将羊肚菌菌帽与菌柄处掰断，将菇帽部分放到一边，只用菌柄部分，取5mm见方的一块羊肚菌组织，接入试管斜面(或平皿)培养基中部，塞好棉塞，19℃，培养4天，注意每天观察长势，杂菌感染严重的及时挑出；

（3）母种提纯：

在分离的过程中，难免有杂菌感染，根据羊肚菌菌丝生长速度快的特点，即使有羊肚菌菌丝与杂菌共同萌发生长，经过3天培养，羊肚菌菌丝长势会超过杂菌一大截，遇到这种情况时就可以进行提纯处理；

将接种钩擦拭消毒，然后在酒精灯火焰顺风方向取下等待提纯菌种试管棉塞，用接种钩在酒精灯火焰处灼烧消毒处理以后，将原来接入的已经感染杂菌的组织块部位的培养基一同钩出试管（平皿），没有感染杂菌长有羊肚菌菌丝的培养基保留1.5cm；注意接种钩尽量不要接触到杂菌感染的部分；然后仔细对接种钩进行彻底消毒处理以后就可以取保留的羊肚菌纯菌丝接入新的pda培养基中，大小以5mm见方一块为宜，然后将提纯后的试管贴好标签，做好记录，再放到19℃进行恒温培养；

（4）脱毒：

对分离到的菌株进行筛选并采取无底试管脱毒法进行处理；1000g培养基配制:木屑435g，石灰10g，尿素5g，水550g；无底试管一根（无底试管直径为20mm）；取上述培养基分成两小断装入无底试管中；具体方法：装料时先用直径小一点的试管插入无底试管内4cm处，然后装料2厘米后压实；接着装另一端，用手把培养料握成团，然后把试管口对着培养料团插进去2cm，再把另一头直径小一点的试管取下来从这一头把培养料向中间推进去，距离另一端培养料1cm处，最后两头用棉塞封口；注意：高压锅灭菌时试管要横放，不能竖放，其它操作按常规；接种时把母种接到任何一端，等羊肚菌菌丝长满了一端培养基后，其爬壁菌丝会隔空长到另一端培养基上，等到长满另一端后，取另一前端菌丝接种；

（5）母种保藏：母种编号保存，制备平行菌种，-80℃超低温冰箱保存3年；

（6）原种接种及培养：按照原种培养料配方由以下各组分重量配比制成1000g培养料：小麦140g，木屑105g，土壤70g，稻壳24.5g，白灰7g，石膏3.5g，水650g。每个罐头瓶装100g，塑料膜封口，灭菌121℃,1小时，冷却，每个试管（平皿）无菌操作接种15（30）个罐头瓶；19℃，培养8天；

（7）栽培种接种及培养：按照栽培料配方由以下各组分重量配比制成1000g培养料：小麦140g，木屑105g，土壤70g，稻壳24.5g，白灰7g，石膏3.5g，水650g。每个塑料袋装500g，封口，灭菌121℃,3小时；冷却，每个原种罐头瓶无菌操作接种60个塑料袋，19℃，培养17天；

（8）营养袋制备：按照营养袋配方由以下各组分重量配比制成1000g培养料：小麦140g，木屑105g，土壤70g，稻壳24.5g，白灰7g，石膏3.5g，水650g。每个塑料袋（12×24cm）装500g，封口，灭菌121℃,3小时（100℃,12小时），冷却。

（9）入库：栽培菌种及营养袋4℃保存；

所述的一种梯棱羊肚菌菌种的北方设施化栽培技术是以梯棱羊肚菌hs-ydj07为母种进行出菇管理及采收的，其梯棱羊肚菌北方设施化栽培技术工艺流程是（详见附图2）：

（1）棚室准备：

棚室处理：每年7-9月封闭棚室，高温3天，闷棚，除草、杀菌、除虫；

土质要求：透气好，无大石块，ph值7；

施肥：播种前7天，施撒发酵好的农家肥，以发酵好的金针菇菌糠或牛粪为主；

旋地：施肥、喷水后旋地，深度30cm；

遮阳：棚内铺设遮阳率75%的遮阳网；

喷水装置：铺设地面滴灌管带和空间微喷带；

作畦床：畦床宽80cm,高度17cm；

（2）菌种准备：

播种时间：北方每年9月中、下旬，气温到16℃；

菌种用量：每亩用菌种量150-180kg；

菌种挑选：菌种老化、太弱、有杂菌感染的剔除，选用表面和袋壁有黄色菌核的菌种；

拌种：将菌种块捏碎，放入干净的盆中加10%清水拌匀，在加入等量的土壤搅拌均匀；

（3）播种：将菌种均匀撒到畦面上，棚温控制在16℃；

（4）覆土：覆土厚度2.5cm，人工或开沟机均可；

（5）发菌管理：

温度：土壤温度维持13℃；

湿度：播种后4天,喷一次重水，平时维持土壤潮湿；

通气：棚内每天通风一次，每次30分钟；

光照：自然；

覆盖稻草：床面可用稻草盖严；

（6）营养袋摆放：

待羊肚菌菌丝生长到床面上时，开始摆放营养袋；摆放前，在营养袋贴地面打3排孔；营养袋要尽可能摆放到有白色菌丝的地方，每亩用营养袋1700个；排成“品”字形，营养袋离床边距离15cm；床面干燥时，在摆放营养袋前喷水，1天后摆袋；摆放营养袋后3天不能喷水，地表温度不能超过15℃；

（7）出菇管理：

菇蕾形成：营养袋疏松，地表菌丝变淡，原基形成；土壤温度在6℃时，重水喷灌，菇蕾出现；

温度：土壤温度8℃，地表温度10℃；

湿度：空气相对湿度75-85%，每天微喷3次，每次4分钟；

光照：自然；

通气：每天通风一次，每次0.8小时；

注意事项：菇蕾期不喷重水；

（8）二茬菇管理：

当第一茬菇完全出完，停水6天，增加棚内的通气量；喷水，等待二茬菇生长；

（9）采收：

当菌帽的蜂窝打开时，开始采收；

一等菇：菌帽长度6cm；

二等菇：菌帽长度4cm；

三等菇：菌帽长度3cm。

序列表

<110>沈阳恒生生物科技发展有限公司沈阳恒生农业发展有限公司

<120>一种梯棱羊肚菌菌种的工厂化生产及北方设施化栽培技术

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